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tm值与退火温度

1.一般来说,较低的退火温度可以提高pcr反应的敏感性但特异性较差;而较高的退火温度则可以提高pcr的特异性但却降低了扩增效率。通常引物与模板的退火温度在45-55度。 2.优化退火温度最好的方法是设置一系列对照反应,即通过在低于计算出的引物T...

我用primer 5设计出来的Tm值从来都是直接当退火温度用。用引物primer-blast的话我都是直接贴序列上去。有其他菌的匹配很正常,有些进化亲缘性很近的,只要在同一物种中没有匹配上的问题应该不大!

不同的PCR MIX所设置的退火温度是不一样的,有的比最低Tm值低5℃,有的低3℃,请你参考你所买的PCR MIX的说明书,上面肯定有详细说明。 一般PCR比最低Tm值低1-5℃,都没什么问题。 RT-PCR的文献上,有推荐的设计软件,也有推荐的PCR MIX,跟着说明...

PCR包括3步,变性,退火,延伸。退火温度一般根据引物TM值确定

Tm指的是把DNA的双螺旋结构降解一半时的温度。 我们PCR时候,当然不能用Tm值来作为退火的温度。一般来说,退火温度比Tm值要低上5度左右。但是这个也不是绝对的。建议你如果说模板比较充足的话,做一个梯度试验。

根据引物的Tm值,在附近5~10度做一个退火温度的梯度吧!大部分的PCR仪器都有这一功能! PCR仪器在一排(12个孔)或一列(8个孔)中每个孔的温度都不同,你在相应的孔中放入待反应的PCR混合液(保证每孔中反应液一致),记录相应的温度,PCR产物经琼脂...

计算退火温度的方法: 1. 退火温度=4×(G+C)+2×(A+T)-(5~8) 只是粗算,有时不灵,但比较简便。 2.用primer5(or oligo6)计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认为这个值就是退火温度,我的经验再加2 or 3度最好。 3.合成引物...

一般50或者55都可以,主要和模板中目的片段的拷贝数以及引物是否容易扩增有关,

tm是50%解链,那么退火要复性,必然不能只有一半的DNA复性,所以温度低一点,就能使引物充分与模板链结合了。

55°C左右吧~一般退火温度比Tm值低5度~但要确定一下你的polymerase适用的退火温度~比如pfu一般不要低于60°C~Taq不低于55°C即可~

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