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pCr tm值选择哪个算法合适

引物设计软件都可以给出Tm,引物长度,碱基组成,引物使用缓冲的离子强度有关. 长度为25mer以下的引物,Tm计算公式为:Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T) 对于更长的寡聚核苷酸,Tm计算公式为: Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size 公式...

引物TM是设值和合成引物时的Tm值, 也就是理论值。 而PCR产物tm值是在实际操作中摸索出来的温度值 引物Tm值与PCR产物Tm值这两个不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时候,程序就会显示出Tm值是多少.在做PCR的时候,将退火温度设定的稍...

纯化的pcr产物测序需要的要求: (1)扩增产物必须特异性扩增,条带单一。如果扩增产物中存在非特异性扩增产物,一般难以得到好的测序结果; (2)必须进行胶回收纯化; (3)DNA纯度在1.6-2.0之间,浓度50ng/ul以上。 方法 (1) 在PCR反应液中加入3...

1.一般来说,较低的退火温度可以提高pcr反应的敏感性但特异性较差;而较高的退火温度则可以提高pcr的特异性但却降低了扩增效率。通常引物与模板的退火温度在45-55度。 2.优化退火温度最好的方法是设置一系列对照反应,即通过在低于计算出的引物T...

55°C左右吧~一般退火温度比Tm值低5度~但要确定一下你的polymerase适用的退火温度~比如pfu一般不要低于60°C~Taq不低于55°C即可~

用2-△△ ct法算的话,应如何算? 假设检测A基因,CT分别为(这里记住CT越大,表明相对含量越低) 普通组/Test1:28 实验组1/Test2:29 实验组2/Test3:30 这时候要设对照了,假设Test1为对照组(普通组),当然是以普通组为对照 那么,相对含量为。

引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不能大于38bp; 引物GC含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近; 引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之间,Tm值曲线以选取72度附近为佳,5'到 3’...

PCR是聚合酶链式(Polymerase Chain Reaction)反应的简称,是一种将几个或几十个拷贝数DNA片段扩增至上百万份拷贝的方法,这是迄今为止最为重要的技术之一。PCR技术的影响不仅仅局限于生物科学领域,几乎人人都可以感受到PCR所带来的改变,在亲...

不同的PCR MIX所设置的退火温度是不一样的,有的比最低Tm值低5℃,有的低3℃,请你参考你所买的PCR MIX的说明书,上面肯定有详细说明。 一般PCR比最低Tm值低1-5℃,都没什么问题。 RT-PCR的文献上,有推荐的设计软件,也有推荐的PCR MIX,跟着说明...

Tm值和溶解曲线是为了检测PCR反应特异性的, 主峰前的一个小峰可能是非特异性扩增, 也可能是引物二聚体,可以降低引物浓度试试

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