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pCr tm值选择哪个算法合适

引物设计软件都可以给出Tm,引物长度,碱基组成,引物使用缓冲的离子强度有关. 长度为25mer以下的引物,Tm计算公式为:Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T) 对于更长的寡聚核苷酸,Tm计算公式为: Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size 公式...

引物TM是设值和合成引物时的Tm值, 也就是理论值。 而PCR产物tm值是在实际操作中摸索出来的温度值 引物Tm值与PCR产物Tm值这两个不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时候,程序就会显示出Tm值是多少.在做PCR的时候,将退火温度设定的稍...

你想问什么,能说具体点吗?你说你的上下游引物Tm值不同?那不是很正常嘛。。

Tm值和溶解曲线是为了检测PCR反应特异性的, 主峰前的一个小峰可能是非特异性扩增, 也可能是引物二聚体,可以降低引物浓度试试

用2-△△ ct法算的话,应如何算? 假设检测A基因,CT分别为(这里记住CT越大,表明相对含量越低) 普通组/Test1:28 实验组1/Test2:29 实验组2/Test3:30 这时候要设对照了,假设Test1为对照组(普通组),当然是以普通组为对照 那么,相对含量为。

1.一般来说,较低的退火温度可以提高pcr反应的敏感性但特异性较差;而较高的退火温度则可以提高pcr的特异性但却降低了扩增效率。通常引物与模板的退火温度在45-55度。 2.优化退火温度最好的方法是设置一系列对照反应,即通过在低于计算出的引物T...

首先告诉你,Tm值没什么用的,你要注意的是退火温度,比如这是我做16S rDNA的程序, 1)95度 10min(这个一般用94-95度,使DNA完全分开,这步一般固定) 2)95度 30秒(94度、95度都可以,这步几乎也是固定的) 3)退火温度 30-60秒(退火温度你...

纯化的pcr产物测序需要的要求: (1)扩增产物必须特异性扩增,条带单一。如果扩增产物中存在非特异性扩增产物,一般难以得到好的测序结果; (2)必须进行胶回收纯化; (3)DNA纯度在1.6-2.0之间,浓度50ng/ul以上。 方法 (1) 在PCR反应液中加入3...

大部分的定量PCR反应产物的片段长度在80~300bp左右,而80bp的TM值为80℃左右,所以绝大多数的定量产物都是大于80℃的。Tm值跟盐离子浓度、片段长度以及GC含量等因素有关系,所以不要太过拘泥于Tm值,建议你可以通过电泳-测序的方法来确认产物。

菌落PCR建议,对菌落进行预变性处理,将挑取的单克隆溶于10ul无菌水(1半保存),分5ul出来进行95度10min变性然后直接放冰上进行预变性处理,相当于提高模板量,提高产量。 有杂带,建议提高TM值或降低Mg离子浓度。

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