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高tm值引物好 还是低tm值引物好

引物TM是设值和合成引物时的Tm值, 也就是理论值。 而PCR产物tm值是在实际操作中摸索出来的温度值 引物Tm值与PCR产物Tm值这两个不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时候,程序就会显示出Tm值是多少.在做PCR的时候,将退火温度设定的稍。

引物TM是设值和合成引物时的Tm值, 也就是理论值。 而PCR产物tm值是在实际操作中摸索出来的温度值 引物Tm值与PCR产物Tm值这两个不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时候,程序就会显示出Tm值是多少.在做PCR的时候,将退火温度设定的稍...

1.一般来说,较低的退火温度可以提高pcr反应的敏感性但特异性较差;而较高的退火温度则可以提高pcr的特异性但却降低了扩增效率。通常引物与模板的退火温度在45-55度。 2.优化退火温度最好的方法是设置一系列对照反应,即通过在低于计算出的引物T...

1、引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不能大于38bp; 2、引物GC含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近; 3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之间,Tm值曲线以选取72度附近为佳...

Tm(解链温度)是指50%双链被解开成单链时的温度。寡核苷酸浓度和盐浓度会影响Tm值的大校 Tm 值 有 多 种 计 算 方 法 。我 们 使 用 近 邻 法 ( P N A S 8 3 ,3 7 4 6- 5 0 )来计算。用这种方法计算前,也有多种方法来估测。如果是15个碱基以下,...

Tm值不用那么在意,差不多就行,我一般是按照引物单上的。基本上你用不同的软件检测同一条引物就会出现不同的Tm值。Touchdown PCR最后应该在那个降低下来的最低温度上继续循环。

Tm值的定义,是两段互补的碱基序列解链50%时的温度。一般的常识是,在设定PCR的program时,Tm值有非常重要的参考意义。 我们设计引物时,经常要在引物5’端加上酶切位点,保护碱基,Kozak等一大串非结合序列。 一般将公司给出的两段引物较低的一...

首先告诉你,Tm值没什么用的,你要注意的是退火温度,比如这是我做16S rDNA的程序, 1)95度 10min(这个一般用94-95度,使DNA完全分开,这步一般固定) 2)95度 30秒(94度、95度都可以,这步几乎也是固定的) 3)退火温度 30-60秒(退火温度你...

设计引物时,tm值就是pcr反应的退火温度吗 : 计算退火温度的方法:1.退火温度=4×(G+C)+2×(A+T)-(5~8) 只是粗算,有时不灵,但比较简便.2.用primer5(or oligo6)计算,引物配对好后,

其实不难,没有必要那么着急。首先,缩小引物长度,PCR扩增序列长度和设计引物长度没有太多必然联系(我经常用15bp引物扩增9K+的序列也没有任何问题),使Tm值一定小于72°C,引物至少保持在12bp以上(如果你不放心,可以用NCBI的序列比较查看一...

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